唯速靈-潛血反應大腸直腸癌篩檢試劑 , dual Occult Blood FaecoCheck test ; 大腸直腸癌躍升為國內〝十大死亡原因〞之第三位 , 首度超越肝癌 ; 便中潛血反應 - 大腸直腸癌篩檢試劑、一種免疫法/化學法雙效合一檢驗片 , Colorectal Cancer , rectal Cancer , Monoclonal Antibodies , OB-test , Colon Cancer , Antibody , Reagent , Diagnostic , Flow cytometry , B27 , 僵直性脊椎炎 , HLA , HCG-test

	唯速靈^® 快速二合一潛血反應檢驗片 Dual Occult Blood FaecoCheck Test	e-mail 回首頁

一種單株抗體免疫色層分析法 , 直接檢測便中的人體血紅素免疫法 / 化學法雙效合一檢驗片 , 糞便潛血反應 - 大腸直腸癌篩檢試劑 (Patented and Pending)

Cat. No: VH-010 (100 tests/kit)

前言
Hanson^TM� 唯速靈® FaecoCheck 檢驗片是一種操作簡單, 極容易使用之側流式單株抗體免疫色層分析試劑; 可直接測定存在於糞便中之人體血紅素(human Hb)。

Hanson^TM� 唯速靈® FaecoCheck 檢驗片能提供一種雙效合一之檢驗結果, 利用提高待測樣品之濃度, 達到在同一檢驗片下, 可同時間判讀免疫法及化學法之試驗結果。其中之免疫法,可直接測定存在於糞便中之人體血紅素(human Hb), 主要用於下腸胃道(Lower GIT) 之篩檢; 而其中之化學法, 作為上腸胃道(Upper GIT) 之篩檢, 主要用來偵測來自上腸胃道之human heme。

Hanson^TM� 唯速靈® FaecoCheck 檢驗片可提供一種初步的篩檢試驗結果, 以期早期發現消化道之病變。任何陽性反應結果, 必須再藉由更詳細之檢查來證實、確定, 例如: 大腸鏡檢查或X-光照影攝影。
　
原理
Hanson^TM� 唯速靈® FaecoCheck 檢驗片, 其中的免疫法是利用一種抗人體血紅素單株抗體(Anti-human Hb Monoclonal Ab), 它對人體血紅素具有高度專一性, 專門用來捕捉、偵測糞便樣品中是否存在人體血紅素, 主要用於下腸胃道(Lower GIT) 出血之篩檢。 Hanson� 唯速靈 FaecoCheck 檢驗片, 其中之化學法是利用Guaiaconic Acid之原理, 來偵測糞便樣品中是否存在人體血紅素或 Heme, 主要用於上腸胃道(Upper GIT) 之篩檢。

上腸胃道之出血, 紅血球破裂釋出血紅素(Hb), 其中血紅素之 Alpha polypeptide chains 及Beta polypeptide chains 遇胃酸會變性, 更將被胃酸消化成 Heme 之形態後, 進入下腸胃道並混於糞便裏。抗人體血紅素單株抗體是無法與Human Heme 結合, 此乃Alpha 及Beta polypeptide chains 所含之抗原位被消化殆盡或變性。

上腸胃道出血之血紅素有可能進入下腸胃道, 根據 Nakama H. 等人於1996所發表之文獻中指出, 對已知150 例Gastric Cancer 的病人中, OB-免疫法可呈現18 % 的敏感性⁽¹⁾, 雖然來自上腸胃道之人體血紅素將被免疫法所檢出, 但將會漏掉以Human Heme 形態進入下腸胃道之cases , 因此若只用免疫法來做常規檢查, 對於上消化道之篩檢將出現漏洞。

雖然 GIT 每天會流失少許 (2 - 3 ml) 之血液⁽²⁾, 皆是屬正常現象。但是, 若 GIT 出血量超過正常狀況, 此種現象, 就是一種病變發生之指標, 從糞便樣品中將可獲得證實。經由Hanson� 唯速靈 FaecoCheck 檢驗片之檢驗, 將可早期發現重要之病變, 例如:息肉(polyps), 憩室(diverticulae), 潰瘍(ulcers) 和直腸癌(colorectal cancer), 以期行最早期之治療。

Hanson^TM� 唯速靈® FaecoCheck Test 是一種側流式免疫色層分析法, 在其試紙(Test strip) 上固定有抗人類血紅素單株抗體, 此抗體能專一的捕捉存於糞便樣品中之人類血紅素。由於此抗體對人類血紅素具有極佳的專一性, 因此可除去引起偽陽性反應之因素, 例如:血黑質(Heme)、血球素(Myoglobin)、食用含動物血之食物、食用過多含氧化酵素(Peroxidases)之蔬菜食物 ----- 等。

由於人類血紅素 (Human Hb) 本身就可當作是一種Micro-peroxidase 或可稱是一種Pseudoperoxidase , 當人類血紅素被單株抗體捕捉後, 於試紙上各加入一滴的 Alpha Guaiaconic Acid 和H2O2 溶液後, 此時被捕捉之人類血紅素經由Alpha Guaiaconic Acid 之催化及 H2O2 之氧化作用後, 將出現藍色反應。實驗結果, 若是在試紙 (Test Strip) 上出現一條藍色線條, 即為免疫法陽性反應。假如人類血紅素不存在樣品內或者樣品混合液內之人類血紅素低於5ug/ml(Cut Off Value) 之濃度, 則試紙上將不會有藍色線條之產生, 是為免疫法陰性反應。於同時間, 可在 Sample Pad 區觀察化學法之反應結果, Sample Pad 區若出現任何藍顏色, 即為陽性之化學法反應。

試劑 / 供應材料
每一組Hanson^TM�唯速靈® FaecoCheck Test 試劑盒包含:
100片Hanson� 唯速靈 FaecoCheck 檢驗片.
1 滴瓶(No 1), 內含 7 ml 之 Alpha Guaiaconic Acid 試劑溶液.
1 滴瓶(No 2), 內含 7 ml 之 Hydrogen Peroxide 試劑溶液.
100 支樣品採集棒.
100 個塑膠夾鏈袋 (選擇).
100 支吸管.
產品說明書一份.

警告和注意
僅供於體外分析實驗使用

	為避免樣品間的交叉污染, 採集樣品時, 請使用新的樣品採集棒.
	切勿使用過期之產品, 產品外盒及單片鋁薄袋, 皆印有末效期.
	糞便樣品及已接觸樣品之物料, 應避免接觸人體, 更應依高感染性廢棄物處理標準, 進行銷毀.
	Alpha Guaiaconic Acid and Hydrogen Peroxide皆不具毒性, 因溶液內含酒精成份, 對皮膚和黏膜具刺激性, 若不小心碰觸, 請立即用清水衝洗.
	Alpha Guaiaconic Acid and Hydrogen Peroxide 溶液內含酒精, 應遠離火苗; 瓶蓋應鎖緊, 以避免蒸發.
	Alpha Guaiaconic Acid and Hydrogen Peroxide 溶液應避免直接曝曬於陽光下.

保存條件
Hanson^TM�唯速靈® Faecocheck Test 試劑盒之最佳保存條件在 2 - 8℃, 但室溫保存亦是被允許的, 除了Alpha Guaiaconic Acid and Hydrogen Peroxide 溶液應保存在 2 - 8℃ 外, 其他部分可置放於30℃以下之室溫保存。

樣品之採集
居家檢體之採集
首先在唯速靈檢驗片上寫上編號, 名字, 日期以及住址後, 開始採樣。可使用樣品採集棒直接於馬桶內或樣品杯內採集糞便樣品, 請採集糞便表面至少兩點及糞便內部至少兩點之樣品, 使用樣品採集棒採集到糞便樣品後, 將樣品施力塗抹於樣品孔處, 施壓塗抹 2 - 3 次即可 ( stool ≧�d 0.125gm ) , 此時糞便樣品已經滲入樣品墊內。施壓塗抹時應讓糞便樣品平塗於樣品孔之樣品墊上, 百分之八十之面積即可, 其厚度以施壓塗抹後之厚度即可, 切勿超過表面水平。再用吸管於樣品上直接滴入4 - 5 滴自來水, 蒸餾水尤佳(允許樣品墊吸收水份), 蓋上上蓋片(Flap A), 接著將唯速靈檢驗片置入夾鏈袋, 於14天內寄抵指定之檢驗室即可。

醫院檢體之採集

1.	可由門診病人或住院病人依照居家採集的方法, 採集樣品後, 直接將唯速靈 FaecoCheck 檢驗片送到指定之檢驗室即可。
2.	可使用糞便採集器(瓶) 採集糞便樣品後, 直接送回檢驗室。

雖然只需極少量的樣品即可執行本試驗 (≧0.125 gm), 但是採集樣品時, 請務必採集糞便表面至少兩點及糞便內部至少兩點之樣品, 以期達到最高之敏感度。

所有取得之檢體應儘速依照步驟A或步驟B, 施加於唯速靈檢驗片之樣品孔內, 以避免人體血紅素之退化。

由於腸胃道出血具有間歇性, 因此連續 3 次不同糞便樣品的檢驗, 是有必要的。

實驗步驟
A) 居家
使用樣品採集棒之步驟:
步驟 1 - 7 由病人操作; 步驟 8 - 12 由醫生或檢驗人員完成.

1.	重要 - 務必讓唯速靈檢驗片回溫至室溫, 方可開起密封之鋁薄袋並取出檢驗片.
2.	在唯速靈檢驗片上寫上檢體之編號, 名字, 日期以及住址
3.	使用樣品採集棒直接於馬桶內或樣品杯內採集糞便樣品, 請採集糞便表面至少兩點及糞便內部至少兩點之樣品.
4.	打開上蓋片(Flap A) 將樣品施力塗抹於樣品孔處, 施壓塗抹 2 - 3 次即可 ( stool ≧ 0.125gm ) , 此時糞便樣品已經滲入樣品墊內, 施壓塗抹時應讓糞便樣品平塗於樣品孔之樣品墊上, 百分之八十之面積即可, 其厚度以施壓塗抹後之厚度即可.
5.	使用吸管於樣品上直接滴入4 - 5 滴自來水(蒸餾水尤佳), 並允許樣品墊完全吸收.
6.	蓋上上蓋片(Flap A), 接著將唯速靈檢驗片置入夾鏈袋.
7.	儘快的送到或寄到指定之檢驗室、護理站或醫療單位.
8.	當收到唯速靈檢驗片時, 請務必確定檢體加入後, 已經至少10分鐘, (當加入檢體後, 唯速靈檢驗片之檢驗期效, 最高可達14天).
9.	檢查唯速靈檢驗片是否寫上記錄(編號, 名字, 日期以及住址, 時間), 並確定呈色劑已經回溫.
10.	撕開位於唯速靈檢驗片背面之觀察遮片(Flap B), 讓試紙顯露出來.
11.	在試紙上施加1 滴 Alpha Guaiaconic Acid 試劑溶液, 接著馬上再滴加1 滴 Hydrogen Peroxide 試劑溶液.
12.	自滴入 Hydrogen Peroxide 試劑溶液後, 3 - 5 分鐘, 判讀結果.

B) 在實驗室或醫院
糞便採集器(瓶) 送回檢驗室之步驟⁽³⁾:
步驟 1 由病人操作; 步驟 2 - 9 由醫生或檢驗人員完成.

1.	使用Hanson 糞便採集器, 採集 ≧0.125g之糞便; 或依照各糞便採集器供應廠商之操作說明, 採集 ≧0.125g之糞便樣品並送回檢驗室.
2.	重要 - 務必讓唯速靈檢驗片回溫至室溫, 方可開起密封之鋁薄袋並取出檢驗.
3.	在唯速靈檢驗片上寫上檢體之編號, 名字, 日期以及住址.
4.	使用Hanson 吸管吸滿蒸餾水, 再注入糞便採集器內, 令蒸餾水與糞便均勻混合後(5 - 10秒), 再用原吸管吸取混合液體樣品.
5.	打開上蓋片(Flap A) 於樣品孔上, 直接滴入4 - 5 滴混合液樣品, 並允許樣品墊完全吸收 (可同時施加一滴於Slide上, 作Parasite檢查).
6.	蓋上上蓋片(Flap A), 讓唯速靈檢驗片靜置10分鐘, (當加入檢體後, 唯速靈檢驗片之檢驗期效, 最高可達14天), 並確定呈色劑已經回溫.
7.	撕開位於唯速靈檢驗片背面之觀察遮片(Flap B), 讓試紙顯露出來.
8.	在試紙上施加1 滴 Alpha Guaiaconic Acid 試劑溶液, 接著馬上再滴加1 滴 Hydrogen Peroxide 試劑溶液.
9.	自滴入 Hydrogen Peroxide 試劑溶液後, 3 - 5 分鐘, 判讀結果.

判讀結果
免疫法之判讀 (主要用於下腸胃道篩檢)
經與糞便混合後之液體樣品, 其內所含之人體血紅素在 5ug/ml 之濃度或以上者, 將呈現陽性反應結果。自滴入 Hydrogen Peroxide 試劑溶液算起, 3 - 5 分鐘, 判讀結果, 10 分鐘後所得之陽性反應結果均屬無效。於Test Strip 區判讀免疫法之結果, 假如Test Strip 區出現藍色線條, 則為免疫法陽性之反應結果。

化學法之判讀 (主要用於上腸胃道篩檢)
在 Sample Pad 區判讀化學法之結果, 假若Sample Pad 區有任何藍顏色出現, 則為陽性之化學法反應結果(Fig. 1),　

Fig 1.

Image15.gif (3091 bytes)

1.	免疫法(陰性反應) Test Strip 區沒有出現藍色線條。化學法(陰性反應) Sample Pad 區沒有任何藍顏色出現。 (Fig. 2)
Fig. 2

2.	免疫法(陽性反應) Test Strip 區出現藍色線條。化學法(陽性反應) Sample Pad 區有任何藍顏色出現。 (Fig. 3)
Fig. 3

3.	免疫法(陰性反應) Test Strip 區沒有出現藍色線條。化學法(陽性反應) Sample Pad 區有任何藍顏色出現。 (Fig. 4)
Fig. 4

4.	免疫法(陽性反應) Test Strip 區出現藍色線條。化學法(陰性反應) Sample Pad 區沒有任何藍顏色出現。(Fig. 5)
Fig. 5

品質管制
當每批受檢樣品被檢測時, 可同時做品管試驗對照組, 請直接向Hanson Hong Biomedical 公司訂購陽性及陰性標準液進行試驗, 亦或自行配置陽性液, 其步驟如下:

1.	抽取少量正常之全血, 置於 EDTA 試管或 Heparin 試管內.
2.	混合均勻, 接著利用蒸餾水做 1:250 稀釋(例如 10μl 血 + 2.5 ml 水).
3.	打開上蓋片(Flap A) 於樣品孔上, 直接滴入4 - 5 滴, 並允許樣品墊完全吸收.
4.	蓋上上蓋片(Flap A), 讓其靜置10分鐘.
5.	撕開位於唯速靈檢驗片背面之觀察遮片(Flap B), 讓試紙顯露出來, 在試紙上滴加1 滴 Alpha Guaiaconic Acid 試劑溶液, 接著馬上再滴加1 滴 Hydrogen Peroxide 試劑溶液.
6.	滴入 Hydrogen Peroxide 試劑溶液後, 3 - 5 分鐘, 將出現一條藍色陽性線條, 假如沒有任何藍色線條出現, 所有病人之試驗應視為無效, 必須重做或儘速與我們聯繫.

產品限制

	不是所有 GIT 病變皆出血不停, 一般之特徵是間歇性的出血, 因此連續 2 次(3 次尤佳) , 不同時間之糞便樣品的檢驗, 是有必要的。
	某些醫療用藥會引起 GIT 出血, 此舉將與 GIT 病變所引起之出血產生混淆, 因而病人之病史及有關用藥需特別注意.
	高劑量之維他命C 有可能會引起免疫法之偽陰性, 因此建議病人儘可能於受檢前兩日起停止服用維他命C.
	擁有血紅素S 和血紅素C 之特殊病人較不適合此項檢驗, 因為本檢驗片所使用之單株抗體對這兩種血紅素, 只有輕微的結合能力.
	檢測結果是由顏色決定, 因此色盲和視障者不適合判讀結果.
	非 GIT 出血之病人, 例如生理期出血, 血尿和痔瘡, 較不適合此項檢驗. 還好, 藉由醫生及檢驗師之手及事前之注意, 是可篩除以上之影響 .
	血紅素並不是很均勻的分布在糞便上(內), 因此採取表面及內部各兩部位之檢體, 是必須的.
	FaecoCheck test 利用提高樣品濃度之原理, 來達成同時觀察免疫法及化學法之結果, 例如:實驗步驟A) 所使用之糞便樣品濃度為 0.125gm stool/250�l buffer, 實驗步驟B) 所使用之糞便樣品濃度為 0.125gm stool/1ml buffer, 是其他單一免疫法產品之待檢樣品濃度的至少≧25倍, 利用提高樣品濃度之原理, 能使實驗達到與單一免疫法相同或更佳之結果. 因此, 請務必依照實驗步驟來執行本試驗.
	切勿使用其他產品內所附之檢體採集管(棒)來採集檢體, 並執行本試驗, 此舉將產生偽陰性結果, 是無效的實驗結果, 請特別注意.
	糞便檢體中之Mucus 會影響 Sample Pad 之吸附作用, 應儘量避免.
	當滴加 Reagents 時, 請確定 Sample Pad 有吸附到Guaiaconic acid, 以利化學之正確判讀.
	本試驗務必選用已知濃度之標準陽性液, 來執行內部品管, 最低陽性標準液濃度為 5ug/ml.

敏感性及專一性
Hanson� 唯速靈 Faecocheck 檢驗片之cut-off為5ug/ml , 檢驗片所使用之單株抗體曾經與Human Heme, 兔Hb, 豬Hb, 羊Hb, 牛Hb 和魚Hb 以及 Myoglobin 做體外交叉反應試驗, 結果證實, 都呈陰性反應. 而蔬菜中所含之氧化酵素(Peroxidases), 亦呈陰性反應. 此乃由於所使用之單株抗體對人體血紅素具有極高之專一性(特異性).

Hanson^TM�唯速靈® Faecocheck 檢驗片曾用10ug/ml 之cut off value 與OC-Hemodia (Eiken, Japan) 作過臨床比較, 44 cases糞便樣品在O-Toluidine test呈陽性反應者; 在FaecoCheck (immunoassay) 呈現6 cases 陽性反應, 38 cases 呈陰性反應; 在OC-Hemodia latex kit 呈現 5 cases 陽性反應, 39 cases 呈陰性反應; 在FaecoCheck (chemical test) 呈現34 cases 陽性反應, 10 cases 呈陰性反應。 6 cases 於FaecoCheck (immunoassay) 呈現陽性反應者, 在OC-Hemodia latex kit 只呈現5 cases 陽性反應, 在FaecoCheck (chemical test) 6 cases皆呈現陽性反應。

經臨床診斷證實, 在FaecoCheck (immunoassay) 呈現陽性反應的6 cases , 大腸癌者1人, 腸胃道惡性腫瘤者1人, 十二指腸潰瘍者2人, 胃潰瘍1人, Samonella infection引起急性場胃炎1人; 其他疾病或無異常者38人。 OC-Hemodia latex kit 呈現 1 cases 之偽陰性 (False negative) , 有可能是液體糞便樣品所造成⁽⁷⁾。

又 305 cases 在O-Toluidine 測試呈陽性反應者, 經由FaecoCheck (Immunoassay) 證實, 只有其中55 cases 是True Positive, O-Toluidine呈現 82 % 之偽陽性(False positive) ⁽⁸⁾。

關於更多特異性的比較數據, 試驗範圍和臨床數據, 目前都在進行中, 後續編印之說明書會陸續加入並詳細記載這些有價值的數據。

參考文獻

1.	Nakama H; Kamijo N; Fujimori K; Fattah AS; Zhang B. Diagnostic accuracy of immunochemical faecal occult blood test for gastric cancer. J Med Screen, 3(3):113-4 1996
2.	Ebaugh FG, Clemens Jr T, Rodnan G, Peterson RE: Quantative measurement of gastrointestinal blood lose. 1. The use of radioactive ⁵¹Cr in pateints with gastrointestinal haemorrhage. Am. J. Med. 1958 25, 169-181.
3.	Data on file, Research and Development Section, Hanson Hong Biomedical Co., Ltd.
4.	Fath, Jr. R.B., Winawer, S.J. Early Diagnosis of Colorectal Cancer. Ann. Rev. Med. 1983. 34, 501-17.
5.	Greegor, D.H. Occult Blood Testing for Detection of Asymptomatic Colon Cancer. Cancer. 1971. 28, 131-4.
6.	Simon, J.B. Occult Blood Screening for Colorectal Carcinoma: A Critical Review. Gastroenterology. 1985. 88, 820-37.
7.	Submitted
8.	Data on file, Research and Development Section, Hanson Hong Biomedical Co., Ltd.

Cat. No.	Description	Packing
VH-010	FaecoCheck Test	100 tests/kit
VH-010-1	Reagent 1 & 2	pair
VH-010-2	Applicator Stick	100ea/pk
VH-010-3	Dropper	100ea/pk
FC-010	Positive control (standard Human Hb)	2 ml/vial
FC-011	Faeces container	1000ea/pk
FC-012	Faeces container	100ea/pk

Hanson Hong Biomedical Co., Ltd.
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Tel: +886 2 27883621 Fax: +886 2 26536316
E-mail:hanson@ms3.hinet.net http://www.hanson.com.tw